第2节基因工程及其应用
1．概述基因工程的原理和应用。(重、难点)
2．了解转基因生物和转基因食品的安全性。
基 因 工 程 的 基 本 操 作 工 具
1．基因工程的概念
2．基因工程的操作工具
(1)“剪刀”和“针线”：
项目
名称
作用
“剪刀”
限制酶
识别特定的核苷酸序列，并在特定的切点上切割DNA分子
“针线”
DNA连接酶
连接脱氧核糖和磷酸之间的缺口
(2)运载体：
①作用：将外源基因送入受体细胞。
探讨：EcoRI限制酶只能识别GAATTC的序列，并在G和A之间将这段序列切开，产生黏性末端，请写出切割后产生的黏性末端。
提示：G AATTC
CTTAA G
探讨：不同的限制酶切割形成的黏性末端一定不能连接在一起吗？为什么？
提示：不一定。例如，限制酶1的识别序列和切点分别是GGATCC在G和G之间切开，限制酶2的识别序列和切点分别是GATC在G之前切开，两者形成的黏性末端是可以互补配对并连接在一起的。
探讨：下图表示一段DNA序列，请确定限制酶和DNA连接酶的作用部位。
提示：限制酶和DNA连接酶均作用于b部位。
1．工具酶的作用比较
(1)限制酶与DNA连接酶的比较：
作用
应用
限制酶
使特定部位的磷酸二酯键断裂
用于提取目的基因和切割载体
DNA
连接酶
在DNA片段之间重新形成磷酸二酯键
用于重组DNA分子(重组质粒)构建
(2)两者的关系可表示为：
【特别提醒】 (1)氢键的断裂和重新形成与限制酶和DNA连接酶无关，氢键的形成不需要酶的作用。
(2)DNA连接酶无识别的特异性，能恢复两核苷酸间的磷酸二
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