课题3 血红蛋白的提取和分离
教材内容解读
要点1 如何分离不同种类的蛋白质
根据蛋白质各种特性的差异分离蛋白质。如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等等。
要点2 凝胶色谱柱
(1)定义
凝胶色谱法也称作分配色谱法,是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。
(2)凝胶
所用的凝胶实际上是一些微小的多孔球体,这些小球体大多数是由多糖类化合物构成的,如葡聚糖或琼脂糖。
(3)分离原理
在小球体内部有许多贯穿的通道,当相对分于质量不同的蛋白质通过凝胶时,相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程较长,移动速度较慢;而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在凝胶外部移动,路程较短,移动速度较快。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。
要点3 缓冲溶液
(1)缓冲溶液的缓冲作用
在一定范围内,缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响,维持pH基本不变。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲液。
(2)缓冲溶液的意义
生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行的,为了能够在实验室条件下准确模拟生物体内的过程,就必须保持体外的pH与体内的基本一致。
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