专题九 现代生物科技专题
核心考点整合
考点整合一:基因工程
1.基因工程的基本操作程序
(1)目的基因的获取
①从基因文库中获取
基因组文库:包含一种生物所有基因的基因文库。
部分基因文库:包含一种生物的一部分基因,如cDNA文库。
②利用PCR(多聚酶链式反应)技术扩增目的基因
目的——获取大量的目的基因;原理——双链DNA的复制;条件——需要DNA模板、引物、四种脱氧核苷酸、耐高温的DNA聚合酶和酶促反应所需的离子,同时还要控制温度;过程——变性、复性和延伸。
③人工合成
如果基因比较小、核苷酸序列已知,可以通过DNA合成仪用化学方法直接合成。
(2)基因表达载体的构建(基因工程的核心)
一个基因表达载体的组成:目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
(3)将目的基因导入受体细胞
①导入植物细胞:农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法等;②导入动物细胞:显微注射技术,即采用显微注射仪将目的基因注入受精卵;③导入微生物细胞:转化法。早期用原核生物作为受体细胞,以大肠杆菌应用最广。一般是将细菌用氯化钙处理制成感受态细胞,再与重组表达载体DNA分子混合,在一定温度下完成转化过程。
(4)目的基因的检测与鉴定
类型
步骤
检测内容
方法
分
测
第一步
转基因生物染色体的DNA是否插入了目的基因
DNA分子杂交技术(DNA和DNA之间)
第二步
目的基因是否转录出mRNA
分子杂交技术(DNA和mRNA之间)
第三步
目的基因是否翻译成蛋白质
抗原—抗体杂交技术(抗原和抗体之间)
个体水
平鉴定
包括抗虫、抗病的接种实验,以确定是否有抗性以及抗性程度;基因工程产品与天然产品活性比较,以确定功能活性是否相同等
2。基因工程中的工具
(1)运载体
作为运载体必须具备三个条件:①能在宿主
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